ANKS6 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-406150-ACT

ANKS6（ankyrin repeat and sterile alpha motif domain containing 6）は、一次繊毛の生物学および中心体関連プロセスに関与する足場（スキャフォールド）様タンパク質をコードしており、上皮の極性化や組織形態形成の協調に寄与します。発生シグナルや機械受容性入力を統合する繊毛シグナル伝達経路の制御など、ネフロン癆（nephronophthisis）関連の繊毛病（ciliopathy）機序との関連が示されています。ANKS6は、アンキリンリピートおよびSAMドメインを介した複合体形成によってタンパク質間相互作用ネットワークに関与し、繊毛輸送、細胞周期の協調、平面内細胞極性（PCP）の研究を支えます。ANKS6機能の破綻や欠失は腎発生異常や嚢胞性腎の表現型と関連しており、繊毛病および腎疾患の生物学的研究において重要です。

ANKS6 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ANKS6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ANKS6 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ANKS6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はANKS6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ANKS6の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のANKS6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるANKS6依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびANKS6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるANKS6経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。