ANKRD9 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-428809-ACT

マウスAnkrd9は、タンパク質間相互作用ネットワークに関与し、細胞内シグナル伝達や細胞状態の制御を形作るアンキリンリピート含有タンパク質ANKRD9をコードします。ANKRD9の分子機能はまだ十分に解明されていませんが、アンキリンリピートタンパク質は一般にアダプター／スキャフォールド機能を調節し、細胞骨格の組織化、小胞輸送、ならびに代謝・ストレス刺激に対する転写応答に関連する経路に影響を及ぼすことが知られています。Ankrd9の発現は、組織の恒常性や分化に関連する文脈で検討されており、制御ネットワークの変化が炎症、代謝バランスの乱れ、成長プログラムの制御異常に伴う表現型に寄与し得ます。そのためAnkrd9は、マウスの細胞系およびin vivoモデルシステムにおいて、経路間の接続性や遺伝子ネットワークの再編成を解析するための有用なノードとなります。

ANKRD9 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Ankrd9の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ANKRD9 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Ankrd9 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAnkrd9転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ANKRD9の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAnkrd9遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるANKRD9依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAnkrd9発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるANKRD9経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。