ANKRD5 Double Nickaseプラスミド (h): sc-408943-NIC

ANKEF1 は、ANKRD5 という命名法に関連づけられるアンキリンリピート含有タンパク質をコードします。アンキリンリピートは一般に、細胞質および核において多タンパク質複合体を編成するタンパク質間相互作用に関与するドメイン構造として知られています。ANKEF1/ANKRD5 はまだ十分に機能解明されていませんが、アンキリンリピートタンパク質はしばしば足場（スキャフォールド）やアダプターとして働き、シグナル伝達、細胞骨格の構築、ユビキチン依存的なターンオーバーを調節します。発現解析や遺伝学的研究から、この遺伝子座が細胞状態やストレス応答に関わる調節プログラムに関与することが示唆されており、ヒト細胞におけるシグナル経路の配線（pathway wiring）の機構的理解を目指す研究で重要な対象となっています。現在の研究では、単一の明確な酵素活性というよりも、ネットワーク結合性の変化を介して疾患関連表現型と関連する可能性が検討されています。

ANKRD5 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ANKEF1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ANKEF1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ANKEF1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ANKEF1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。