ANKFN1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-406947-ACT

ヒトのANKFN1は、アンキリンリピートおよびフィブロネクチンIII型ドメインを含むタンパク質をコードしており、タンパク質間相互作用や足場（スキャフォールド）機能を介して、細胞内局在の制御やシグナル伝達のダイナミクスに影響を与えると考えられています。本遺伝子はまだ十分に解明されていないものの、そのドメイン構造から、細胞骨格関連プロセスや、ストレス応答および分化シグナルに対する細胞応答を調節する制御複合体の協調に関与する可能性が示唆されます。トランスクリプトーム解析やゲノム研究では、特定の神経系および発生関連の表現型においてANKFN1の発現変動や関連シグナルが報告されており、機序解明の候補として注目されています。ANKFN1依存的な相互作用ネットワークと下流の転写プログラムを同定することは、組織発生や疾患生物学に関連する細胞モデルにおける経路マッピングに有用です。

ANKFN1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ANKFN1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ANKFN1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ANKFN1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はANKFN1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ANKFN1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のANKFN1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるANKFN1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびANKFN1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるANKFN1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。