Angptl4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401369-ACT

ANGPTL4 codifica a angiopoietina-like 4 (Angptl4), uma glicoproteína secretada induzida por sinais de nutrientes e de oxigênio que modula o manejo de lipídios e a biologia vascular. A Angptl4 inibe a lipoproteína lipase para regular o metabolismo de lipoproteínas ricas em triglicerídeos e interage com programas metabólicos controlados pela sinalização de PPAR, conectando as respostas do tecido adiposo e do fígado ao jejum e à inflamação. No meio extracelular, ela pode influenciar o comportamento endotelial, a função de barreira e o remodelamento da matriz extracelular, ligando o estado metabólico à homeostase tecidual. A expressão desregulada de ANGPTL4 tem sido associada a distúrbios metabólicos, microambientes inflamatórios e processos relacionados a tumores, tornando-o um nó útil para estudos mecanísticos do fluxo lipídico e de respostas vasculares.

Angptl4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ANGPTL4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Angptl4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ANGPTL4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ANGPTL4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Angptl4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ANGPTL4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Angptl4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Angptl4 em células tumorais com expressão de ANGPTL4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.