Angptl3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402932-ACT

ANGPTL3 codifica a angiopoietina-like 3, uma glicoproteína secretada produzida predominantemente por hepatócitos, que regula a homeostase sistêmica de lipídios e energia. A Angptl3 inibe a lipase lipoproteica e a lipase endotelial, modulando o processamento de lipoproteínas ricas em triglicerídeos e o remodelamento de HDL, e integra-se a redes de sinalização metabólica que influenciam o fluxo de ácidos graxos e a depuração de lipoproteínas. A atividade alterada de ANGPTL3 está associada a fenótipos de dislipidemia e ao risco cardiometabólico, tornando-a um nó-chave para o estudo de programas de secreção hepática e do manejo de lipídios em tecidos periféricos. Como fator circulante, a Angptl3 também fornece um desfecho mensurável e conveniente para conectar a regulação transcricional a mudanças detectáveis em vias do metabolismo lipídico.

Angptl3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ANGPTL3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Angptl3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ANGPTL3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ANGPTL3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Angptl3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ANGPTL3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Angptl3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Angptl3 em células tumorais com expressão de ANGPTL3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.