Plasmide CRISPR d'Activation (h) Angptl2: sc-406130-ACT

ANGPTL2 code l’angiopoïétine‑like protéine 2 (Angptl2), une glycoprotéine sécrétée qui module les interactions cellule–cellule et cellule–matrice dans les compartiments vasculaires et stromaux. Angptl2 est impliquée dans la signalisation inflammatoire et le remodelage tissulaire, en influençant le comportement endothélial, le recrutement des leucocytes et la dynamique de la matrice extracellulaire via des voies liées à la signalisation des intégrines, à l’activation de NF‑κB et aux réseaux de cytokines. Une expression dérégulée d’ANGPTL2 a été associée à l’inflammation chronique, aux réponses au stress métabolique, à la fibrose et à des modifications du microenvironnement tumoral, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier les mécanismes reliant l’inflammation à l’angiogenèse et au renouvellement de la matrice. In vitro, la perturbation d’ANGPTL2 est couramment utilisée pour explorer la communication paracrine entre cellules immunitaires, fibroblastes et cellules endothéliales, et pour cartographier les programmes transcriptionnels en aval.

Angptl2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ANGPTL2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Angptl2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ANGPTL2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ANGPTL2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Angptl2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ANGPTL2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Angptl2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Angptl2 dans les cellules tumorales présentant une expression de ANGPTL2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.