Plasmide CRISPR/Cas9 KO Angiotensinogen (m): sc-419047

Présentation

Le gène murin **Agt** code l’angiotensinogène, une glycoprotéine sécrétée d’origine hépatique qui sert de précurseur aux peptides angiotensines au sein du système rénine–angiotensine (SRA). Le clivage protéolytique par la rénine et l’enzyme de conversion de l’angiotensine génère des angiotensines bioactives qui régulent le tonus vasculaire, l’homéostasie du sodium et des fluides, ainsi que la signalisation endocrine au niveau du rein, de la surrénale, du cœur et du cerveau. L’activité du SRA médiée par l’angiotensinogène interagit avec les voies de l’inflammation et du stress oxydatif et influence le remodelage tissulaire et la fibrose via la signalisation de l’angiotensine II. Une expression ou un traitement anormal de **Agt** est largement utilisé comme point d’entrée mécanistique pour étudier la physiopathologie cardiovasculaire et rénale, les réponses au stress métabolique et le dialogue inter‑organes dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Angiotensinogen (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Agt dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Agt, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Agt à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Angiotensinogen.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Agt pour l'étude de la signalisation de Angiotensinogen, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Agt essentiels à la fonction de Angiotensinogen
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Agt pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Angiotensinogen plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Angiotensinogen plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Agt. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Angiotensinogen plasmide HDR (m) et le Angiotensinogen (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Agt pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Agt définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.