Angiotensinogen Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401013-ACT

O AGT humano codifica o angiotensinogénio, uma glicoproteína secretada derivada do fígado que é o precursor obrigatório dos péptidos de angiotensina no sistema renina–angiotensina (SRA). O processamento proteolítico do angiotensinogénio inicia cascatas que regulam o tónus vascular, o equilíbrio hídrico e eletrolítico e a remodelação tecidular, através de redes de sinalização a jusante mediadas por angiotensina. Para além da sinalização endócrina sistémica, o AGT produzido localmente sustenta a atividade parácrina do SRA no rim, na vasculatura, no tecido adiposo e no cérebro, ligando-o a vias de stress oxidativo, inflamação e renovação da matriz extracelular. A expressão desregulada de AGT e o desequilíbrio do SRA estão associados à biologia das doenças cardiometabólicas e renais, oferecendo uma base mecanística para estudar a regulação hemodinâmica e a comunicação entre órgãos em modelos celulares humanos.

Angiotensinogen O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AGT sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Angiotensinogen O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AGT em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AGT, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Angiotensinogen. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AGT nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Angiotensinogen no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Angiotensinogen em células tumorais com expressão de AGT silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.