Angiopoietin 2/Ang-2/ANGPT2 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400477-LAC

O gene humano ANGPT2 codifica a angiopoietina-2 (Ang-2), um ligante secretado do receptor tirosina-quinase endotelial TIE2 (TEK) que regula o remodelamento vascular e a homeostase endotelial. Em conjunto com a ANGPT1, a Ang-2 modula a fosforilação de TIE2 para influenciar a estabilidade das junções endoteliais, as interações com pericitos e a angiogênese por brotamento, integrando-se a programas mediados por VEGF durante a inflamação e o remodelamento tecidual. A expressão de ANGPT2 pode ser induzida por hipóxia, citocinas e estresse de cisalhamento e está ligada à ativação endotelial, ao tráfego de leucócitos e ao aumento da permeabilidade vascular. A sinalização desregulada de ANGPT2 está associada à angiogênese patológica e à disfunção vascular observadas na biologia do câncer, em retinopatias, na endoteliopatia associada à sepse e em doenças inflamatórias crônicas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Angiopoietin 2/Ang-2/ANGPT2 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de ANGPT2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Angiopoietin 2/Ang-2/ANGPT2 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição ANGPT2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Angiopoietin 2/Ang-2/ANGPT2. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo ANGPT2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.