ANG I Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401766-ACT

O ANG humano codifica a angiogenina, uma ribonuclease secretada que se liga a recetores na superfície celular e a componentes da matriz extracelular para influenciar o comportamento das células endoteliais, as respostas ao stress e o metabolismo de RNA. O ANG participa em processos associados à angiogénese e à sinalização de nutrientes, incluindo a modulação de fragmentos derivados de rRNA/tRNA e efeitos a jusante na síntese proteica e na sobrevivência celular. A expressão ou atividade desregulada de ANG tem sido associada à remodelação vascular e a fenótipos neurodegenerativos, sendo frequentemente investigada em contextos de inflamação, hipóxia e biologia do microambiente tumoral. Estas funções tornam o ANG um ponto de entrada útil para estudar sinalização parácrina, programas de stress dependentes de clivagem de RNA e a comunicação cruzada entre vias que molda a homeostase dos tecidos.

ANG I O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ANG sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ANG I O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ANG em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ANG, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ANG I. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ANG nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ANG I no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ANG I em células tumorais com expressão de ANG silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.