Plasmide CRISPR d'Activation (h) Androgen Receptor: sc-400026-ACT

AR code pour le récepteur humain des androgènes, un récepteur nucléaire hormonal activé par un ligand, qui se lie aux androgènes, se transloque dans le noyau et régule la transcription via des éléments de réponse aux androgènes. La signalisation du récepteur des androgènes coordonne la progression du cycle cellulaire, les programmes de différenciation, le métabolisme et le remodelage de la chromatine grâce à des interactions avec des co‑régulateurs et à un dialogue avec les voies PI3K/AKT, MAPK et WNT. Une activité déréglée d’AR est associée à une biologie dépendante du système endocrinien et est fréquemment étudiée dans les cancers hormonodépendants, des phénotypes neuromusculaires tels que l’amyotrophie spinale et bulbaire, ainsi que des troubles du métabolisme des stéroïdes. En tant que nœud transcriptionnel, AR constitue un readout exploitable pour étudier l’utilisation des enhancers, l’état épigénétique et les réseaux de gènes dépendants du stimulus.

Androgen Receptor Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de AR sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Androgen Receptor Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus AR dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription AR, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Androgen Receptor. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus AR natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Androgen Receptor au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Androgen Receptor dans les cellules tumorales présentant une expression de AR silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.