AMPKβ2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403537

概要

PRKAB2は、AMP/ADPとATPの比率を介して細胞のエネルギー状態を感知する、三量体のセリン／スレオニンキナーゼであるAMP活性化プロテインキナーゼ（AMPK）の調節サブユニットβ2をコードしています。AMPKβ2は複合体の組み立てと局在化に寄与し、上流からの活性化をリン酸化カスケードへとつなぐことで、同化（アナボリック）プログラムを抑制しつつ、グルコース取り込み、脂肪酸酸化、ならびにmTORや関連する栄養感知ネットワークとのクロストークを介したオートファジーなどの異化（カタボリック）経路を促進します。これらの機能を通じて、AMPKβ2は代謝ストレスへの適応、ミトコンドリア恒常性、細胞増殖制御の研究において重要です。AMPKシグナルの変調は代謝性疾患やがん生物学と関連づけられており、PRKAB2は、エネルギー依存的な増殖・生存経路の制御を解析するうえで有用な結節点となります。

AMPKβ2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPRKAB2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PRKAB2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PRKAB2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、AMPKβ2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、AMPKβ2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PRKAB2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• AMPKβ2の機能に不可欠なPRKAB2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PRKAB2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• AMPKβ2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびAMPKβ2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PRKAB2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  AMPKβ2 HDRプラスミド（h）および AMPKβ2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPRKAB2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPRKAB2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。