AMPD2 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-430952-ACT

マウスのAmpd2は、アデノシン一リン酸デアミナーゼ2（AMPD2）をコードしており、プリンヌクレオチドサイクル内でAMPをIMPへ脱アミノ化する反応を触媒する酵素である。これにより、アデニレートのエネルギーチャージやヌクレオチドプールのバランスに影響を与える。AMP/ATPの恒常性を調節することを通じて、AMPD2活性は、AMPKに連動したエネルギーセンシング、解糖系フラックス、ストレス応答性のプリン回収経路（サルベージ）などを含む、より広範な代謝制御とも結び付く。AMPの脱アミノ化が乱れると、細胞内のIMPおよび下流のプリン代謝産物が変動し、ヌクレオチド供給に依存する細胞増殖や分化プログラムに影響し得る。AMPD2に関連するヌクレオチド代謝の破綻は、エネルギーバランスやプリン代謝回転が関与する神経代謝的脆弱性やその他の疾患とも関連付けられており、代謝および神経系経路の研究における機構的ハブとしての有用性を裏付けている。

AMPD2 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Ampd2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

AMPD2 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Ampd2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAmpd2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性AMPD2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAmpd2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAMPD2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAmpd2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAMPD2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。