AMBP Plasmide Double Nickase (h): sc-403136-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- AMBP Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il AMBP Double Nickase Plasmid (h) e il AMBP Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira AMBP. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: AMBP Antibody (532): sc-81948
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
AMBP Plasmide Double Nickase (h) | sc-403136-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AMBP Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403136-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AMBP codifica il precursore dell’alfa-1-microglobulina/bikunin, una glicoproteina secreta che viene processata proteoliticamente in alfa-1-microglobulina e bikunin, le quali circolano nel plasma e sono presenti nei fluidi extracellulari. L’alfa-1-microglobulina agisce come scavenger legante eme e radicali, implicato nell’omeostasi redox e nella protezione dallo stress ossidativo, mentre il bikunin è un inibitore delle proteasi seriniche di tipo Kunitz che contribuisce alla regolazione delle proteasi extracellulari e alla modulazione dell’infiammazione. Attraverso complessi di inter-alfa-inibitore contenenti bikunin, AMBP è collegato alla stabilizzazione della matrice extracellulare, alle reti di proteasi correlate alla coagulazione e alle risposte al danno tissutale. Alterazioni dell’espressione e del processamento di AMBP sono state associate a stati infiammatori, a marker di disfunzione renale ed epatica e a processi di rimodellamento rilevanti in diversi contesti di modelli di malattia.
AMBP Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AMBP nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AMBP. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AMBP. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AMBP interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.