ALPPL2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h2): sc-401492-KO-2

Panoramica

ALPPL2 codifica la fosfatasi alcalina di tipo placentare 2 (placental-like 2), un ectoenzima ancorato alla glicosilfosfatidilinositolo (GPI) che idrolizza i monoesteri del fosfato sulla superficie cellulare. Regolando la defosforilazione di substrati extracellulari, ALPPL2 può influenzare la disponibilità locale di fosfato, la segnalazione nei microdomini di membrana e programmi associati alla differenziazione, in particolare in contesti epiteliali e legati alle cellule germinali. La sua espressione è spesso utilizzata come marcatore di specifici stati di sviluppo e un’alterata espressione di ALPPL2 è stata riportata in molteplici dataset relativi al cancro. Queste caratteristiche rendono ALPPL2 rilevante per studi sull’identità cellulare, sulla biologia degli enzimi di superficie e sul rimodellamento delle vie di segnalazione durante la trasformazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ALPPL2 (h2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ALPPL2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ALPPL2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ALPPL2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ALPPL2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ALPPL2 per lo studio della segnalazione di ALPPL2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ALPPL2 critici per la funzione di ALPPL2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ALPPL2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ALPPL2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ALPPL2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ALPPL2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ALPPL2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ALPPL2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ALPPL2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ALPPL2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.