ALKBH5 Double Nickaseプラスミド (m): sc-435243-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- ALKBH5 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- ALKBH5ダブルニカースプラスミド（m）およびALKBH5ダブルニカースプラスミド（m2）は、Alkbh5を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
ALKBH5 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-435243-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ALKBH5 Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-435243-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
マウスのAlkbh5は、Fe(II)/2-オキソグルタル酸依存性ジオキシゲナーゼであるALKBH5をコードしており、RNAのN6-メチルアデノシン（m6A）脱メチル化酵素として機能して、mRNAのスプライシング、核外輸送、安定性、翻訳を調節します。エピトランスクリプトームの状態を動的に形成することで、ALKBH5は細胞運命の決定、ストレス応答、発生過程に関連する遺伝子発現プログラムに影響を与えます。ALKBH5の活性は、m6Aの「ライター」および「リーダー」経路と交差し、転写産物ごとのアウトカムや下流のシグナル伝達ネットワークを制御します。ALKBH5によるRNAメチル化制御の破綻は、疾患関連の細胞環境において増殖や分化の表現型変化と関連づけられており、RNA修飾生物学の機構研究における重要な解析ノードとしての有用性を支持しています。
ALKBH5 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Alkbh5 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Alkbh5内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Alkbh5の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Alkbh5が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。