ALKBH4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406350

Visão geral

ALKBH4 codifica um membro da família AlkB de dioxigenases dependentes de Fe(II)/2-oxoglutarato, implicadas em reações de desmetilação oxidativa em ácidos nucleicos e proteínas. O ALKBH4 humano tem sido associado à regulação da dinâmica do citoesqueleto de actina e da arquitetura celular, em consonância com papéis em processos como migração, adesão e divisão celular. Por meio dessas atividades, o ALKBH4 é frequentemente estudado no contexto da estabilidade do genoma, das respostas ao estresse e do controle transcricional ou pós-transcricional. Alterações na expressão ou na função de ALKBH4 têm sido investigadas em múltiplos contextos relevantes para doenças, incluindo fenótipos associados ao câncer, nos quais o remodelamento do citoesqueleto e o metabolismo de DNA/RNA são frequentemente desregulados.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO ALKBH4 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene ALKBH4 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do ALKBH4, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do ALKBH4 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína ALKBH4.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de ALKBH4 para a investigação da sinalização de ALKBH4, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) ALKBH4 críticos para a função ALKBH4
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos ALKBH4 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo ALKBH4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo ALKBH4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus ALKBH4. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo ALKBH4 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR ALKBH4 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia ALKBH4 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo ALKBH4 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.