非 CRISPR 数据：图片说明了可视化 CRISPR 实验结果的抗体质量。
非 CRISPR 数据：图片说明了可视化 CRISPR 实验结果的抗体质量。
Alix CRISPR/Cas9 KO质粒 (m): sc-422154
- 针对种属：mouse
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- Alix CRISPR/Cas9 基因敲除（KO）质粒（m） 是一组质粒混合物，每种质粒均编码 Cas9 核酸酶及针对特定靶点的 20 核苷酸引导 RNA（gRNA），其设计基于 GeCKO v2 文库中的序列，旨在实现最高的基因敲除效率
- gRNA序列引导Cas9在Alix基因组位点诱导位点特异性双链断裂（DSBs），从而通过非同源末端连接（NHEJ）实现基因敲除
- 嘌呤霉素抗性基因和 RFP 基因两侧有 LoxP 位点，因此在建立稳定的基因敲除细胞系后，可以通过 Cre 重组酶（Cre 向量：sc-418923）去除选择标记。
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：Alix: sc-53540，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
Alix CRISPR/Cas9 KO质粒 (m) | sc-422154 | 20 µg | $397.00 |
概述
Pdcd6ip 编码 ALIX，这是一种多功能衔接蛋白，通过与 ESCRT 组分（包括 CHMP4 蛋白）以及 TSG101 等伙伴蛋白相互作用，将膜重塑与内体运输过程耦联起来。在小鼠细胞中，ALIX 参与多泡体（multivesicular body）的生成、外泌体释放、胞质分裂末端的断裂分离（abscission）以及质膜修复；并且通过其结合网络，能够影响与凋亡相关的信号传导。ALIX 依赖的 ESCRT 活性也会在有包膜病毒出芽过程中被“挪用”，同时还调控膜受体的周转，从而将 Pdcd6ip 与控制细胞信号传递和蛋白质稳态的通路联系起来。在实验系统中，ESCRT/ALIX 介导的运输失调与神经退行性变、肿瘤生物学以及免疫和病毒致病过程有关联，因此 Pdcd6ip 是开展膜动力学机制研究的一个有用节点。
Alix CRISPR/Cas9 KO质粒（m）是一组旨在针对性地破坏mouse细胞系中Pdcd6ip基因的质粒池。每条质粒均共表达一种独特的单引导RNA（sgRNA），该sgRNA针对Pdcd6ip基因内的特定位点，并携带来自化脓性链球菌的Cas9核酸酶。这些质粒还编码GFP，可通过荧光显微镜或流式细胞术对成功转染的细胞进行荧光标记和富集。
多引导设计提高了在Cas9介导的双链断裂形成后，产生破坏Pdcd6ip开放阅读框的插入或缺失（indels）的概率。CRISPR/Cas9系统引入的DNA断裂通过内源性非同源末端连接（NHEJ）途径修复，通常会导致移码突变，从而使Alix蛋白表达失活。
该CRISPR敲除系统能够高效构建Pdcd6ip缺失的细胞模型，用于Alix信号传导研究、功能基因组学研究、癌症生物学研究以及人类细胞系中治疗反应的评估。
主要特点
- 针对对 Alix 功能至关重要的 Pdcd6ip 外显子的 sgRNA
通过单质粒共表达 SpCas9 和 sgRNA 以简化递送过程
GFP 报告基因用于识别转染细胞
针对多个 Pdcd6ip 基因组位点的质粒池以提高敲除效率
兼容转染递送
设计变体
CRISPRs +/- HDR
- 由 Alix CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m) 和 Alix CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m2) 编码的 gRNA 分别靶向 Pdcd6ip 基因座内的不同位点。可能提供其中一种或两种靶向设计。具体供应情况请参见相关产品。
由 Alix HDR 质粒（m）编码的 HDR 供体构建体以及 Alix HDR质粒（m2）编码的HDR供体构建体包含一个嘌呤霉素抗性盒和一个RFP报告基因，其两侧由Pdcd6ip同源臂包围，以支持在与CRISPR/Cas9敲除设计对应的特定Pdcd6ip靶位点进行同源导向修复。HDR供体的供应情况可能有所不同。请查看“相关产品”了解供应情况。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。