Aldolase C CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400988

概要

ALDOCはアルドラーゼCをコードしており、解糖系および糖新生における重要な可逆反応を触媒するフルクトース二リン酸アルドラーゼのアイソザイムです。具体的には、フルクトース1,6-ビスリン酸をグリセルアルデヒド3-リン酸とジヒドロキシアセトンリン酸へと変換します。ヒト組織ではALDOCは中枢神経系に高発現しており、解糖系フラックスをレドックス恒常性や生合成需要と結び付けることで、神経細胞のエネルギー代謝に寄与します。さらに代謝機能にとどまらず、アルドラーゼCは代謝物感受性のシグナル伝達ネットワークを介して、細胞骨格の構築や細胞ストレス応答の制御にも関与すると報告されています。ALDOCの発現量や活性の変化は、多様な疾患状態にみられる神経学的脆弱性や代謝再プログラミングとの関連でしばしば研究されており、細胞・組織モデルにおける経路解析のための機序的な切り口を提供します。

Aldolase C CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるALDOC遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ALDOC内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ALDOCのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Aldolase Cタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Aldolase Cシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ALDOC欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Aldolase Cの機能に不可欠なALDOCエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ALDOCゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Aldolase C CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびAldolase C CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ALDOC遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Aldolase C HDRプラスミド（h）および Aldolase C HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはALDOCホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のALDOC標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。