Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419078

Visão geral

Aldh1a1 codifica a aldeído desidrogenase 1-A1 (ALDH1A1), uma enzima citosólica dependente de NAD(P)+ que oxida uma ampla gama de aldeídos endógenos e xenobióticos aos seus correspondentes ácidos carboxílicos, apoiando assim a desintoxicação celular e a homeostase redox. Em tecidos de camundongo, a ALDH1A1 contribui para o metabolismo de retinoides ao catalisar a conversão de retinaldeído em ácido retinoico, ligando o gene a programas transcricionais que influenciam a diferenciação, o metabolismo e as respostas ao estresse oxidativo. A atividade da ALDH1A1 interage com vias de peroxidação lipídica e de depuração de aldeídos reativos, ajudando a limitar o estresse carbonílico e a formação subsequente de adutos em proteínas e DNA. Alterações na expressão ou na função da ALDH1A1 têm sido associadas a fenótipos relacionados ao estresse oxidativo e são frequentemente estudadas em contextos como desregulação metabólica, neurobiologia e biologia de células tumorais, como um marcador do estado celular.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Aldh1a1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Aldh1a1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Aldh1a1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Aldh1a1 para a investigação da sinalização de Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Aldh1a1 críticos para a função Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Aldh1a1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Aldh1a1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Aldh1a1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Aldh1a1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.