Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419078

概要

Aldh1a1 は、アルデヒドデヒドロゲナーゼ1-A1（ALDH1A1）をコードする遺伝子であり、細胞質に局在する NAD(P)+ 依存性酵素です。内因性および外因性（生体外来性）の幅広いアルデヒドを対応するカルボン酸へ酸化し、細胞の解毒機構とレドックス恒常性の維持に寄与します。マウス組織では、ALDH1A1 はレチナール（レチナールデヒド）をレチノイン酸へ変換することでレチノイド代謝に関与し、分化、代謝、酸化ストレス応答に影響する転写プログラムと結び付いています。ALDH1A1 活性は脂質過酸化や反応性アルデヒドの除去経路とも交差し、カルボニルストレスおよびそれに続くタンパク質・DNA 付加体の形成を抑えるのに役立ちます。ALDH1A1 の発現や機能の変化は酸化ストレス関連の表現型と関連付けられており、代謝異常、神経生物学、腫瘍細胞生物学などの文脈で、細胞状態のマーカーとしてもしばしば研究されています。

Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAldh1a1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Aldh1a1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Aldh1a1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Aldh1a1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1の機能に不可欠なAldh1a1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Aldh1a1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびAldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Aldh1a1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 HDRプラスミド（m）および Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAldh1a1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAldh1a1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。