ALB/Albumin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400269-ACT

ALB codifica a albumina, a proteína plasmática mais abundante, sintetizada pelos hepatócitos e secretada na circulação, onde mantém a pressão osmótica coloide e atua como um importante transportador de ácidos graxos, bilirrubina, hormônios e muitas pequenas moléculas. A albumina participa do transporte sistêmico de nutrientes e metabólitos, influencia o equilíbrio redox por meio do tamponamento de tióis baseado em cisteína e contribui para a disponibilidade extracelular de ligantes, o que pode moldar a sinalização metabólica hepática. A expressão de ALB está estreitamente acoplada a programas de diferenciação de hepatócitos e a redes transcricionais específicas do fígado, sendo, por isso, um marcador amplamente utilizado de identidade e função hepáticas. Níveis alterados de albumina e transcrição desregulada de ALB são comumente associados à disfunção hepática e frequentemente monitorados em estudos de lesão hepática, fibrose e mecanismos de doença metabólica.

ALB/Albumin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ALB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ALB/Albumin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ALB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ALB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ALB/Albumin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ALB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ALB/Albumin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ALB/Albumin em células tumorais com expressão de ALB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.