Akt3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400028-NIC

AKT3は、セリン／スレオニンキナーゼであるAkt3をコードしており、PI3K–AKTシグナル伝達の中核的エフェクターとして、増殖因子や栄養状態からのシグナルを統合し、細胞の生存、増殖、グルコース代謝、ならびにmTORに連動した生合成プログラムを制御します。Akt3の活性は、FOXO転写因子、GSK3、TSC2、BADなどの下流標的に影響し、アポトーシス抵抗性、細胞周期の進行、細胞ストレス応答のあり方を形作ります。ヒトの生物学においてAKT3は、神経系の発生やニューロンの恒常性維持で重要な役割を担っており、AKT3シグナルの破綻は、がんに伴うシグナル伝達ネットワークの再配線や神経発達障害との関連が示唆されています。こうした経路上のつながりから、AKT3は、シグナル伝達の機構解析、系譜（ライン）特異的な増殖制御、状況依存的な脆弱性の解明に有用な研究対象（ノード）となります。

Akt3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における AKT3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、AKT3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、AKT3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、AKT3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。