Akt3 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400028-NIC

AKT3 codifica a quinase de serina/treonina Akt3, um efetor central da sinalização PI3K–AKT que integra sinais de fatores de crescimento e de nutrientes para regular a sobrevivência celular, a proliferação, o metabolismo da glicose e programas biossintéticos ligados ao mTOR. A atividade de Akt3 influencia alvos a jusante, incluindo fatores de transcrição FOXO, GSK3, TSC2 e BAD, moldando a resistência à apoptose, a progressão do ciclo celular e as respostas ao estresse celular. Na biologia humana, AKT3 tem papéis proeminentes no desenvolvimento do sistema nervoso e na homeostase neuronal, e a desregulação da sinalização de AKT3 tem sido implicada na reprogramação de vias de sinalização associada ao câncer e em transtornos do neurodesenvolvimento. Essas conexões de via tornam o AKT3 um nó útil para estudos mecanísticos de transdução de sinal, controle de crescimento específico de linhagem e vulnerabilidades dependentes do contexto.

Akt3 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus AKT3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de AKT3. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função AKT3. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com AKT3 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.