AKR7A2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403377-ACT

AKR7A2は細胞質局在のアルド-ケト還元酵素をコードしており、NADPH依存的に反応性の高いアルデヒドおよびケトンを還元し、求電子性ストレスや酸化ストレスに対する細胞防御を支えます。脂質過酸化に由来するアルデヒドや生体異物（ゼノバイオティクス）代謝産物を解毒することで、AKR7A2はレドックス恒常性と細胞プロテオームの完全性維持に寄与します。その活性はアルデヒド解毒ネットワークや、毒性物質曝露への感受性および炎症性シグナル伝達を規定するより広範なストレス応答経路と交差しています。AKR7A2の制御異常は、カルボニルストレスやゼノバイオティクス代謝が疾患関連の表現型に影響する状況で検討されており、肝機能障害や腫瘍関連の酸化ストレス状態などが含まれます。

AKR7A2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性AKR7A2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

AKR7A2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における AKR7A2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAKR7A2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性AKR7A2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAKR7A2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAKR7A2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAKR7A2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAKR7A2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。