AKAP 95 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403651-ACT

O AKAP8 humano codifica a proteína de ancoragem da A-quinase 95 (AKAP 95), um arcabouço nuclear que organiza espacialmente a proteína quinase A e outros complexos regulatórios para coordenar a sinalização dependente de fosforilação na cromatina. A AKAP 95 participa do processamento de RNA e do controle transcricional por meio de interações com componentes da matriz nuclear e fatores associados ao splicing, conectando a arquitetura nuclear a programas de expressão gênica. Ela tem sido implicada na progressão do ciclo celular e na regulação do genoma, tornando-se relevante para estudos de sinalização proliferativa e de redes transcricionais desreguladas observadas no câncer e em outros distúrbios associados ao crescimento.

AKAP 95 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AKAP8 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

AKAP 95 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AKAP8 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AKAP8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de AKAP 95. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AKAP8 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de AKAP 95 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via AKAP 95 em células tumorais com expressão de AKAP8 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.