AKAP 12 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-406008-ACT

AKAP12（A-kinase anchoring protein 12；gravin）は、細胞膜および細胞骨格においてPKAおよびPKCシグナル伝達を空間的に編成する足場タンパク質であり、受容体の脱感作、細胞骨格リモデリング、ならびに細胞周期制御を協調的に調節します。GPCRやインテグリン近傍にキナーゼおよびホスファターゼを係留することで、AKAP12はフォーカルアドヒージョン動態、細胞移動、バリア機能を制御する経路に影響を与え、下流ではMAPKシグナルやcAMP依存性シグナル伝達にも作用します。AKAP12の発現変化やエピジェネティックな制御は、がん生物学、血管機能障害、炎症性微小環境に関連する細胞接着・運動プログラムの変化と結び付けられています。これらの特性により、AKAP12はヒト細胞におけるシグナルのコンパートメント化（区画化）と、状況依存的な転写応答を研究するうえで有用なノードとなります。

AKAP 12 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性AKAP12の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

AKAP 12 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における AKAP12 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAKAP12転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性AKAP 12の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAKAP12遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAKAP 12依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAKAP12発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAKAP 12経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。