AK1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419062

Übersicht

Ak1 kodiert die Adenylatkinase 1 (AK1), eine zytosolische Phosphotransferase, die die reversible Reaktion ATP + AMP ⇌ 2 ADP katalysiert und damit zur Aufrechterhaltung der Homöostase von Adeninnukleotiden sowie zur Pufferung der zellulären Energieladung beiträgt. Indem AK1 die Umwandlung von ATP/ADP/AMP mit dem Bedarf von Glykolyse und oxidativer Phosphorylierung koppelt, beeinflusst sie den Energiefluss in Situationen mit hohem Umsatz, etwa bei Muskelkontraktion, neuronaler Aktivität und Stressantworten. Eine veränderte Adenylatkinase-Aktivität kann AMP-abhängige Signalwege modulieren, einschließlich solcher, die mit AMPK und dem Purinstoffwechsel verknüpft sind, und verbindet Ak1 dadurch mit metabolischer Anpassung und Redoxgleichgewicht. In Mausmodellen ermöglicht eine Beeinflussung von Ak1 Studien zur Energiemetabolik, zur mitochondrialen Funktion und zu Phänotypen mit Relevanz für kardiometabolische und neuromuskuläre Störungen, ohne daraus klinische Aussagen abzuleiten.

Das AK1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ak1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ak1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ak1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die AK1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ak1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der AK1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ak1-Exone abzielen, die für die AK1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ak1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom AK1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom AK1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ak1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das AK1 HDR-Plasmid (m) und AK1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ak1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ak1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.