AK1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419062

Panoramica

Ak1 codifica l’adenilato chinasi 1 (AK1), una fosfotransferasi citosolica che catalizza la reazione reversibile ATP + AMP ⇌ 2 ADP, contribuendo a mantenere l’omeostasi dei nucleotidi adenilici e a tamponare la carica energetica cellulare. Accoppiando l’interconversione ATP/ADP/AMP alle richieste della glicolisi e della fosforilazione ossidativa, AK1 influenza i flussi energetici in contesti ad alto turnover come la contrazione muscolare, l’attività neuronale e le risposte allo stress. Alterazioni dell’attività dell’adenilato chinasi possono modulare la segnalazione dipendente da AMP, incluse vie che interagiscono con AMPK e con il metabolismo delle purine, collegando Ak1 all’adattamento metabolico e all’equilibrio redox. Nei sistemi murini, la perturbazione di Ak1 supporta studi sul metabolismo energetico, sulla funzione mitocondriale e su fenotipi rilevanti per disfunzioni cardiometaboliche e neuromuscolari, senza implicare esiti clinici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO AK1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ak1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ak1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ak1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina AK1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ak1 per lo studio della segnalazione di AK1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ak1 critici per la funzione di AK1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ak1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal AK1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal AK1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ak1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal AK1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR AK1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ak1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ak1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.