Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
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AIRE-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401225
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- AIRE-1 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico AIRE-1, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:AIRE-1 Anticorpo (C-2): sc-373703
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
AIRE-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401225 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O regulador autoimune (AIRE; AIRE-1) é um regulador transcricional nuclear que impõe a tolerância imune central ao promover a expressão ectópica de antígenos restritos a tecidos em células epiteliais tímicas medulares, permitindo a seleção negativa e moldando o repertório de células T. O AIRE coordena processos associados à cromatina e à transcrição por meio de interações com marcas de histonas e com a maquinaria transcricional, sustentando programas de expressão gênica ligados à seleção tímica e à homeostase imune. A disfunção do AIRE está associada à quebra da tolerância e à autoimunidade, e programas transcricionais dependentes de AIRE alterados têm sido estudados no contexto de fenótipos inflamatórios e de desregulação imunológica. Como resultado, o AIRE é amplamente utilizado como um locus modelo para investigar o controle transcricional, a biologia da apresentação de antígenos e os mecanismos que governam a autotolerância.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO AIRE-1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene AIRE em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do AIRE, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do AIRE na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína AIRE-1.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de AIRE para a investigação da sinalização de AIRE-1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) AIRE críticos para a função AIRE-1
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos AIRE para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo AIRE-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo AIRE-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus AIRE. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo AIRE-1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR AIRE-1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia AIRE para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo AIRE definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.