AIF Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-424143-NIC

O gene **Aifm1** de camundongo codifica o **fator indutor de apoptose** (AIF), uma flavoproteína localizada principalmente no **espaço intermembrana mitocondrial** que sustenta a **fosforilação oxidativa** e a **homeostase redox**. Sob estresse celular intenso, o AIF pode translocar-se para o núcleo e promover **condensação de cromatina independente de caspases** e **fragmentação de DNA em grande escala**, ligando a disfunção mitocondrial a programas regulados de morte celular. Por meio dessas funções, o AIF se conecta ao **controle de qualidade mitocondrial**, à sinalização por **espécies reativas de oxigênio (ROS)** e a vias **bioenergéticas** que moldam a sobrevivência neuronal, a integridade muscular e a homeostase de células imunes. A desregulação de processos associados ao AIF é relevante para estudos de **neurodegeneração**, **encefalomiopatias mitocondriais**, modelos de **lesão isquêmica** e fisiopatologia **inflamatória** em camundongos.

AIF O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Aifm1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Aifm1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Aifm1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Aifm1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.