AHDC1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-408863-ACT

AHDC1 (AT-hook DNA binding motif containing 1) codifica uma proteína nuclear associada à cromatina, implicada na regulação da transcrição e na organização genômica de ordem superior por meio da ligação ao DNA e da interação com complexos regulatórios. Está relacionada a processos que governam o neurodesenvolvimento, a diferenciação neuronal e a manutenção de programas de expressão gênica, de acordo com papéis no remodelamento da cromatina e em redes regulatórias associadas a RNA. A disrupção genética de AHDC1 está associada à síndrome de Xia-Gibbs, um distúrbio do neurodesenvolvimento caracterizado por atraso no desenvolvimento e fenótipos neurológicos, destacando sua importância no controle transcricional relevante para o cérebro. Assim, a função alterada de AHDC1 é de interesse para o estudo da regulação epigenética, de redes gênicas neuronais e das relações genótipo–fenótipo em modelos celulares humanos.

AHDC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AHDC1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

AHDC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AHDC1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AHDC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de AHDC1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AHDC1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de AHDC1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via AHDC1 em células tumorais com expressão de AHDC1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.