AGXT Double Nickaseプラスミド (h): sc-407697-NIC

ヒトAGXTは、アラニンをアミノ基供与体として用い、グリオキシル酸をグリシンへとトランスアミネーションする、ペルオキシソーム局在のPLP（ピリドキサールリン酸）依存性酵素であるアラニン‐グリオキシル酸アミノトランスフェラーゼをコードしている。この活性は肝臓におけるグリオキシル酸の解毒の中核を担い、アミノ酸代謝とペルオキシソーム恒常性を結び付けることで、グリオキシル酸がシュウ酸へ変換されるのを抑制する。AGXT機能の破綻は原発性高シュウ酸尿症1型と関連し、シュウ酸産生の増加とシュウ酸カルシウム沈着を特徴とすることから、AGXTはペルオキシソーム代謝制御を研究する上での重要な結節点となる。さらにAGXTは、細胞内ターゲティング、酵素補因子依存性、ならびにヒト細胞における代謝ストレス応答を検討するためのモデル遺伝子としても用いられている。

AGXT ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における AGXT 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、AGXT内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、AGXTの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、AGXTが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。