AGXT CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419052

概要

マウスAgxtは、アラニン‐グリオキシル酸アミノトランスフェラーゼ（AGXT）をコードしている。AGXTはペルオキシソームに局在するPLP（ピリドキサールリン酸）依存性酵素で、グリオキシル酸をグリシンに変換し、アミノ酸分解代謝をグリオキシル酸の解毒と結び付ける。この活性は、シュウ酸の生成を抑えるとともに、ペルオキシソームにおける酸化還元状態および基質フラックスをミトコンドリアや細胞質の代謝と統合することで、肝臓の代謝恒常性を支える。AGXT機能の破綻は、グリオキシル酸の蓄積やシュウ酸の過剰産生といった表現型と関連し、過シュウ酸尿様の代謝異常に関与する経路をモデル化する。したがってAgxtは、ペルオキシソーム生物学、代謝物駆動性の酸化ストレス、ならびに遺伝子型と代謝の関係をマウス系で研究するうえで有用な標的である。

AGXT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAgxt遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Agxt内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Agxtのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、AGXTタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、AGXTシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Agxt欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• AGXTの機能に不可欠なAgxtエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Agxtゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• AGXT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびAGXT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Agxt遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  AGXT HDRプラスミド（m）および AGXT HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAgxtホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAgxt標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。