AGR2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403036-ACT

Anterior gradient 2 (AGR2) é um fator humano do retículo endoplasmático, semelhante a uma isomerase de dissulfeto de proteína, que auxilia o dobramento de proteínas secretórias e a proteostase por meio de interações com redes de chaperonas do RE. O AGR2 contribui para a regulação da diferenciação epitelial, da produção de mucinas e da manutenção da homeostase do RE, vinculando sua atividade à sinalização da resposta a proteínas mal dobradas (UPR) e a processos de controle de qualidade dependentes do estado redox. A expressão alterada de AGR2 tem sido associada à biologia de tumores epiteliais, incluindo mudanças na adesão celular, migração e fenótipos secretórios, tornando-o um nó útil para estudar programas de adaptação ao estresse e de diferenciação em modelos relevantes para o câncer. Essas funções também posicionam o AGR2 como um marcador mecanístico em estudos de estresse do RE, tráfego proteico e estados de linhagem epitelial.

AGR2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AGR2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

AGR2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AGR2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AGR2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de AGR2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AGR2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de AGR2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via AGR2 em células tumorais com expressão de AGR2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.