adseverin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422815

概要

Scinは、ゲルゾリン・スーパーファミリーに属するCa²⁺制御性のアクチン切断・キャッピングタンパク質であるアドセベリン（adseverin）をコードしており、刺激依存的に線維状アクチンの動態を再構築する。アドセベリンはアクチンフィラメントの迅速な解体と再編成を促進することで、膜輸送、細胞形態の変化、調節性分泌といった過程を支え、とりわけ造血系細胞や分泌細胞の文脈で重要である。その活性はカルシウムシグナル伝達や細胞骨格制御経路と交差し、接着、遊走、分泌小胞のエキソサイトーシスに影響を与える。アクチンの再構築異常やカルシウム依存性分泌の破綻は炎症性および腫瘍性の表現型にしばしば関与するため、Scinはマウスモデルにおける細胞骨格関連疾患の生物学を機構的に研究するうえで有用なノードとなる。

adseverin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるScin遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Scin内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Scinのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、adseverinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、adseverinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Scin欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• adseverinの機能に不可欠なScinエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Scinゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• adseverin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびadseverin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Scin遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  adseverin HDRプラスミド（m）および adseverin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはScinホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のScin標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。