Plasmide CRISPR d'Activation (h) ADRP: sc-400802-ACT

PLIN2 code pour l’adipose differentiation-related protein (ADRP), une périlipine associée aux gouttelettes lipidiques qui recouvre les réserves de lipides neutres et en régule la stabilité, le renouvellement et l’accès par les lipases. ADRP contribue à coordonner la gestion intracellulaire des triglycérides et des esters de cholestérol, reliant la biogenèse des gouttelettes lipidiques à l’équilibre énergétique cellulaire, aux réponses au stress oxydant et à la signalisation métabolique. Une expression altérée de PLIN2 est associée à des phénotypes d’accumulation lipidique observés dans les dysfonctions métaboliques et les états inflammatoires, et elle est fréquemment étudiée dans le contexte de la stéatose hépatique, de la formation de cellules spumeuses athéroscléreuses et du métabolisme lipidique tumoral. En tant qu’indicateur de la dynamique du stockage lipidique, ADRP est largement utilisée pour étudier les voies qui contrôlent l’absorption des acides gras, leur estérification et la lipophagie.

ADRP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PLIN2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ADRP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PLIN2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PLIN2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ADRP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PLIN2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ADRP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ADRP dans les cellules tumorales présentant une expression de PLIN2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.