ADM Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402779-ACT

O gene ADM humano codifica a adrenomedulina, um hormônio peptídico secretado amplamente expresso em tecidos vasculares e epiteliais, que regula a vasodilatação, a integridade da barreira endotelial e a homeostase de fluidos. Por meio da sinalização via receptor semelhante ao receptor de calcitonina (CALCRL) acoplado a RAMP2 ou RAMP3, a ADM ativa a via cAMP/PKA e, a jusante, as vias MAPK e PI3K–AKT para modular a angiogênese, a sobrevivência celular e respostas inflamatórias. A ADM responde à hipóxia e ao estresse celular e contribui para programas adaptativos que moldam o remodelamento vascular e a perfusão tecidual. A expressão desregulada de ADM tem sido associada à disfunção cardiovascular, ao extravasamento vascular associado à sepse e à angiogênese associada a tumores, tornando-a um alvo útil para estudos mecanísticos da biologia endotelial e da sinalização no microambiente.

ADM O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ADM sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ADM O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ADM em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ADM, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ADM. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ADM nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ADM no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ADM em células tumorais com expressão de ADM silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.