ADHβ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402141-ACT

ADH1B codifica a subunidade beta da desidrogenase alcoólica humana (ADHβ), uma oxidorredutase citosólica dependente de zinco que catalisa a oxidação do etanol e de outros álcoois alifáticos aos seus aldeídos correspondentes, utilizando NAD+ como cofator. Essa atividade é central para o metabolismo hepático do álcool e se conecta à desintoxicação subsequente de aldeídos e à homeostase redox, influenciando o equilíbrio NADH/NAD+ e as respostas ao estresse oxidativo. Variações na expressão ou na atividade de ADH1B têm sido associadas a diferenças interindividuais na depuração do álcool e na carga de acetaldeído, com relevância para lesão tecidual relacionada ao álcool e vias associadas à carcinogênese. Além do etanol, a ADHβ contribui para um processamento metabólico mais amplo de substratos alcoólicos endógenos e xenobióticos, apoiando estudos de adaptação metabólica e sinalização de estresse celular.

ADHβ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ADH1B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ADHβ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ADH1B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ADH1B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ADHβ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ADH1B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ADHβ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ADHβ em células tumorais com expressão de ADH1B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.