Adenylate cyclase 8/AC8/ADCY8 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402004-ACT

O gene humano **ADCY8** codifica a **adenilato ciclase 8 (AC8)**, uma adenilil ciclase de membrana estimulada por cálcio/calmodulina que catalisa a conversão de ATP em **cAMP**, um segundo mensageiro central que controla a sinalização mediada por **PKA**, **EPAC** e canais regulados por nucleotídeos cíclicos. Ao acoplar a dinâmica intracelular de **Ca2+** à produção de cAMP, a AC8 molda respostas dependentes de **GPCRs** e da atividade celular que regulam a excitabilidade neuronal, a plasticidade sináptica e processos de estímulo-secreção. A atividade de **ADCY8** integra-se a programas de transcrição dependentes de **CREB** e ao feedback de fosfodiesterases para ajustar a amplitude e a duração da sinalização. Estudos genéticos e funcionais implicam a desregulação de cAMP ligada a **ADCY8** em fenótipos neuropsiquiátricos e cognitivos, sustentando pesquisas mecanísticas sobre aprendizagem, memória e sinalização em nível de circuitos.

Adenylate cyclase 8/AC8/ADCY8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ADCY8 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Adenylate cyclase 8/AC8/ADCY8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ADCY8 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ADCY8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Adenylate cyclase 8/AC8/ADCY8. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ADCY8 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Adenylate cyclase 8/AC8/ADCY8 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Adenylate cyclase 8/AC8/ADCY8 em células tumorais com expressão de ADCY8 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.