Adenylate cyclase 4/AC4/ADCY4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403016-ACT

O gene humano ADCY4 codifica a adenilato ciclase 4 (AC4), uma enzima associada à membrana que converte ATP em AMP cíclico (cAMP) a jusante da sinalização de receptores acoplados à proteína G. Ao modular vias dependentes de cAMP/PKA e de EPAC, a AC4 influencia cascatas de fosforilação, programas transcricionais e respostas celulares como secreção, metabolismo e sinalização inflamatória. A atividade de ADCY4 integra entradas reguladas por cálcio e por Gαs, moldando a amplitude e a duração da dinâmica de segundos mensageiros entre diferentes tipos celulares. Alterações na regulação de redes de sinalização de cAMP envolvendo ADCY4 têm sido investigadas no contexto de características cardiometabólicas e processos relacionados ao sistema imune, apoiando seu uso como um nó mecanístico em estudos de vias.

Adenylate cyclase 4/AC4/ADCY4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ADCY4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Adenylate cyclase 4/AC4/ADCY4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ADCY4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ADCY4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Adenylate cyclase 4/AC4/ADCY4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ADCY4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Adenylate cyclase 4/AC4/ADCY4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Adenylate cyclase 4/AC4/ADCY4 em células tumorais com expressão de ADCY4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.