Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-430515-LAC

O gene murino Adcy3 codifica a adenilato ciclase 3 (AC3/ADCY3), uma enzima associada à membrana que converte ATP em AMP cíclico (cAMP), acoplando assim a sinalização de GPCR a programas de transcrição a jusante dependentes de PKA e CREB. A AC3 contribui para a sinalização sensorial e neuroendócrina, incluindo a transdução olfatória e o controlo, regulado por cAMP, do metabolismo e da diferenciação celulares. Ao moldar a dinâmica compartimentalizada de cAMP, a ADCY3 influencia processos como a excitabilidade neuronal, vias de resposta hormonal e a homeostase energética. A desregulação da sinalização ligada à ADCY3 tem sido associada a fenótipos metabólicos e características neurocomportamentais em estudos genéticos e funcionais, apoiando a sua relevância em modelos de obesidade, sensibilidade à insulina e disfunção sensorial.

As Partículas de Ativação Lentivirais Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Adcy3 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Adcy3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Adcy3 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.