Adenylate cyclase 10/ADCY10 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406235

概要

ADCY10はアデニル酸シクラーゼ10（可溶性アデニリルシクラーゼ、sAC）をコードしており、Gタンパク質共役受容体（GPCR）の活性化ではなく、重炭酸イオンおよびカルシウムのシグナルに応答して細胞内でcAMPを産生する酵素である。cAMPのマイクロドメイン形成を通じて、ADCY10はPKAおよびEPACシグナルを調節し、ミトコンドリア機能、イオン輸送、精子の受精能獲得、pH感知応答などの過程に影響を与える。sAC由来のcAMPは、代謝および酸塩基平衡の情報をリン酸化ネットワークと統合し、転写プログラムや細胞のストレス適応にも作用する。ADCY10活性の異常は、男性不妊、腎臓や気道における重炭酸取り扱い、腫瘍に関連したcAMPシグナルの再配線などの文脈で検討されており、機序解明のための経路研究における重要性が示されている。

Adenylate cyclase 10/ADCY10 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるADCY10遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ADCY10内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ADCY10のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Adenylate cyclase 10/ADCY10タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Adenylate cyclase 10/ADCY10シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ADCY10欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Adenylate cyclase 10/ADCY10の機能に不可欠なADCY10エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ADCY10ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Adenylate cyclase 10/ADCY10 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびAdenylate cyclase 10/ADCY10 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ADCY10遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Adenylate cyclase 10/ADCY10 HDRプラスミド（h）および Adenylate cyclase 10/ADCY10 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはADCY10ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のADCY10標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。