ADAR2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401166-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- ADAR2 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- ADAR2ダブルニカースプラスミド（h）およびADAR2ダブルニカースプラスミド（h2）は、ADARB1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: ADAR2 抗体 (C-6): sc-514581
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
ADAR2 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-401166-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ADAR2 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-401166-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADARB1はADAR2（RNAに作用するアデノシン脱アミノ化酵素）をコードしており、二本鎖RNA構造内でA-to-I編集を触媒することで、転写産物のコードを書き換え、RNAの二次構造を再構成します。ADAR2の活性は神経系で顕著で、イオンチャネルや神経伝達に関連するmRNAに影響を及ぼすことから、RNA編集は興奮性、シナプスシグナル伝達、神経発生と結び付けられています。コードの書き換えにとどまらず、ADAR2はRNAの安定性やスプライス部位の選択を調節し得るほか、本来であればパターン認識受容体を介して認識されるdsRNA基質を改変することで、自然免疫のセンシングの調律にも寄与します。ADAR2依存的な編集パターンの破綻は神経疾患の機序と関連付けられており、RNA編集が遺伝子制御を組み替えるという観点から、がんや炎症の文脈でも検討されています。
ADAR2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ADARB1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ADARB1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ADARB1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ADARB1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。