ADAM9 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-403665-LAC

ADAM9 codifica uma metaloprotease–desintegrina transmembranar que media o “shedding” (clivagem e liberação) do ectodomínio de diversas proteínas de superfície celular, moldando a remodelação da matriz extracelular, a adesão célula–célula e a disponibilidade de receptores/ligantes. Por meio do processamento proteolítico de substratos envolvidos na sinalização de fatores de crescimento e citocinas, o ADAM9 pode influenciar vias ligadas à dinâmica epitélio–mesênquima, à migração e a respostas inflamatórias. Sua atividade se cruza com a adesão dependente de integrinas e com redes de metaloproteases que regulam o turnover de proteínas de membrana e a proteólise pericelular. A expressão ou atividade desregulada de ADAM9 tem sido associada à biologia da invasão tumoral, à remodelação relacionada à fibrose e a processos neuroinflamatórios, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos de sinalização dirigida por proteases.

As Partículas de Ativação Lentivirais ADAM9 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de ADAM9 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais ADAM9 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição ADAM9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de ADAM9. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo ADAM9 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.