ADAM22 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405581-ACT

ADAM22 codifica um membro neuronal transmembranar da família ADAM (desintegrina e metaloprotease) que funciona principalmente como um hub de adesão e sinalização na superfície celular, em vez de atuar como uma protease catalítica. No sistema nervoso, ADAM22 liga-se ao ligante secretado LGI1 e organiza a arquitetura sináptica ao estabilizar complexos com proteínas de ancoragem associadas à PSD e reguladores de canais iónicos, apoiando a maturação das sinapses excitatórias e a excitabilidade dos circuitos. Por meio dessas interações, ADAM22 contribui para processos como manutenção de sinapses, organização de neuritos e modulação da neurotransmissão. Estudos genéticos e funcionais relacionaram a disrupção da sinalização ADAM22/LGI1 a fenótipos do neurodesenvolvimento e associados a crises convulsivas, tornando-o um alvo relevante para estudos mecanísticos de disfunção sináptica.

ADAM22 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ADAM22 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ADAM22 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ADAM22 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ADAM22, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ADAM22. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ADAM22 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ADAM22 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ADAM22 em células tumorais com expressão de ADAM22 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.