ACSVL1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405122-ACT

SLC27A2 codifica a acil‑CoA sintetase de cadeias muito longas 1 (ACSVL1), uma enzima de transporte e ativação de ácidos graxos que converte ácidos graxos de cadeia longa e muito longa em tioésteres acil‑CoA. Essa reação sustenta o uso de lipídios por mitocôndrias e peroxissomos, acoplando a captação de ácidos graxos à β‑oxidação, à remodelação lipídica e à homeostase energética. A atividade da ACSVL1 se cruza com vias que regulam a dinâmica de gotículas lipídicas, a função peroxissomal e as respostas ao estresse metabólico. A desregulação da ativação de ácidos graxos e do processamento de lipídios de cadeias muito longas é relevante para estudos de mecanismos de doenças metabólicas, de sinalização inflamatória ligada à lipotoxicidade e do metabolismo lipídico específico de tecidos em modelos de fígado e músculo.

ACSVL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC27A2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ACSVL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC27A2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC27A2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ACSVL1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC27A2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ACSVL1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ACSVL1 em células tumorais com expressão de SLC27A2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.