ACSL4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-424503-ACT

O gene Acsl4 de camundongo codifica a acil-CoA sintetase membro 4 da família de cadeia longa (ACSL4), uma enzima associada à membrana que ativa ácidos graxos poli-insaturados de cadeia longa ao convertê-los em tioésteres acil-CoA para incorporação em fosfolipídios e em vias metabólicas lipídicas subsequentes. A ACSL4 é um determinante-chave do remodelamento de fosfolipídios e da composição de membrana sensível ao estado redox, conectando a utilização de lipídios às respostas ao estresse oxidativo e à suscetibilidade à ferroptose. Por meio da regulação do metabolismo do ácido araquidônico e do ácido adrenico, a ACSL4 influencia a sinalização lipídica inflamatória, a função mitocondrial e a dinâmica de membranas. Alterações na atividade e na expressão de ACSL4 têm sido associadas a patologias impulsionadas pela peroxidação lipídica e vêm sendo estudadas em contextos que incluem neurodegeneração, disfunção metabólica e adaptação ao estresse em células cancerosas.

ACSL4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Acsl4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ACSL4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Acsl4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Acsl4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ACSL4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Acsl4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ACSL4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ACSL4 em células tumorais com expressão de Acsl4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.