ACSL3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403546-ACT

ACSL3 (membro 3 della famiglia delle acil-CoA sintetasi a catena lunga) catalizza l’attivazione ATP-dipendente degli acidi grassi a catena lunga in acil-CoA, una reazione di accesso fondamentale che convoglia i substrati lipidici verso la β-ossidazione, la sintesi dei glicerolipidi e il rimodellamento dei fosfolipidi. Controllando la disponibilità dei pool di acil-CoA sulle membrane intracellulari, ACSL3 contribuisce a coordinare la biogenesi delle gocce lipidiche, la composizione di membrana e la flessibilità metabolica in condizioni di stress nutrizionale. L’attività di ACSL3 è collegata a vie che regolano l’omeostasi lipidica e il metabolismo energetico, e la sua disregolazione è stata associata ad alterazioni dei programmi lipogenici e a fenotipi di proliferazione cellulare. Queste funzioni rendono ACSL3 un bersaglio utile per analizzare come l’utilizzo degli acidi grassi si intrecci con la dinamica degli organelli e con le reti di segnalazione in modelli cellulari umani.

ACSL3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ACSL3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ACSL3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ACSL3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ACSL3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ACSL3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ACSL3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ACSL3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ACSL3 nelle cellule tumorali con espressione di ACSL3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.