Plasmide CRISPR/Cas9 KO acrogranin (m): sc-420696

Présentation

Grn code l’acrogranin (progranuline), une glycoprotéine sécrétée et associée aux lysosomes qui module la croissance cellulaire, la survie et la signalisation inflammatoire dans divers tissus. Chez la souris, l’acrogranin participe à l’homéostasie endolysosomale et à la protéostasie, et peut influencer des voies liées à l’activation de la microglie, aux réseaux de cytokines et au remodelage de la matrice extracellulaire. Des altérations de la fonction de GRN/acrogra nin ont été associées à la neurodégénérescence, à des réponses immunitaires aberrantes et à des phénotypes de réparation tissulaire, ce qui en fait une cible utile pour étudier la neuroinflammation et la biologie du stress lysosomal. Les processus dépendants de Grn sont également pertinents dans des modèles de remodelage métabolique et fibreux, où les facteurs de croissance sécrétés et la fonction lysosomale se rejoignent.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO acrogranin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Grn dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Grn, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Grn à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine acrogranin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Grn pour l'étude de la signalisation de acrogranin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Grn essentiels à la fonction de acrogranin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Grn pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le acrogranin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le acrogranin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Grn. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le acrogranin plasmide HDR (m) et le acrogranin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Grn pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Grn définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.