Plásmido CRISPR de Activación (h) acrogranin: sc-401924-ACT

GRN codifica acrogranina (progranulina), una glucoproteína secretada que favorece el crecimiento y la supervivencia celular, así como la remodelación tisular, mediante la modulación de la señalización inflamatoria y de la actividad de proteasas en el entorno extracelular. La acrogranina influye en la homeostasis lisosomal y en el tráfico endosomal, y su escisión en granulin as puede remodelar las respuestas de citocinas y los programas de estrés celular. En el sistema nervioso contribuye a la función microglial, al mantenimiento sináptico y a la resiliencia neuronal, mientras que en tejidos periféricos afecta la reparación de heridas y las interacciones estroma–epitelio. La expresión desregulada de GRN o la haploinsuficiencia se asocian con neurodegeneración y disfunción inmunitaria, y la señalización alterada de la progranulina también se estudia en cáncer y biología de la fibrosis como regulador de la proliferación y la inflamación.

acrogranin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GRN sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

acrogranin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GRN en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GRN, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de acrogranin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GRN y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de acrogranin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía acrogranin en células tumorales con expresión de GRN silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.