ACOX1CRISPR激活质粒(m2): sc-418948-ACT-2

小鼠Acox1基因编码酰基辅酶A氧化酶1（ACOX1），这是一种位于过氧化物酶体的黄素蛋白，催化直链脂肪酰基辅酶A进行β-氧化的第一步且为限速步骤，生成反式-2-烯酰辅酶A，并参与过氧化物酶体依赖的脂质分解代谢；ACOX1的活性有助于维持细胞脂质与能量稳态，并与过氧化物酶体生物发生、通过产生H2O2参与氧化应激调控，以及PPAR驱动的转录程序等代谢信号网络相互交织；Acox1失调与超长链脂肪酸周转异常、肝脏脂质堆积、炎症反应以及更广泛的过氧化物酶体代谢表型相关，因此与脂肪肝疾病机制及代谢重塑研究密切相关；在生物医学研究模型中，通过基因编辑或遗传扰动小鼠Acox1可用于解析过氧化物酶体β-氧化通路、脂质组学特征，以及过氧化物酶体功能障碍在器官或细胞类型特异层面的后果。

ACOX1 CRISPR激活质粒（m2）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Acox1的表达。

ACOX1 CRISPR激活质粒（m2）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的Acox1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于Acox1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性ACOX1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的Acox1位点，并能够研究内源性位点上依赖于ACOX1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Acox1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟ACOX1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。